Prueba de Esbach
Definición de prueba de Esbach
La prueba de Esbach es una de las pruebas bioquímicas más antiguas utilizadas para detectar proteínas urinarias como la albúmina cuando la orina se combina con ácido cítrico y pícrico. Aunque no se ha discutido mucho a lo largo de la historia, es útil para la determinación tanto cualitativa como cuantitativa de la albúmina en la muestra de orina. La prueba fue descubierta por Georges Hubert Esbach en 1874 como uno de los primeros intentos de cuantificación de la albúmina en la orina.
La prueba de Esbach ha sido continuamente criticada por precipitar no solo albúmina sino todas las demás proteínas en la orina como peptonas, mucina y proteosas. Sin embargo, más tarde, Purdy describió una versión modificada de la prueba para detectar solo la albúmina y nada más. La base de esta prueba es la formación de precipitación cuando la orina se mezcla con un reactivo que contiene ácido pícrico y cítrico. La cuantificación de la proteína se puede realizar midiendo la altura del depósito, lo que da una cantidad medida de albúmina. Esta prueba, sin embargo, tiene sus limitaciones. Aunque se ha demostrado que detecta grandes cambios en la proteinuria, la prueba de Esbach es demasiado inexacta a niveles bajos de proteínas. Sin embargo,
Objetivos de la prueba de Esbach
- Detectar la presencia de proteínas en una muestra.
- Detectar la presencia de albúmina y otras proteínas en una muestra de orina.
Principio de la prueba de Esbach
La prueba se basa en el principio de precipitación de albúmina en presencia de ácidos orgánicos. Los ácidos orgánicos (ácido cítrico y ácido pícrico) añadidos a la muestra existen como iones negativos en forma de solución. De manera similar, las proteínas en la muestra de orina existen como cationes cuando el pH isoeléctrico de la proteína está en el lado ácido. Por lo tanto, es esencial que la muestra de orina a analizar sea lo suficientemente ácida para que se produzca la disociación. Cuando se agregan los ácidos orgánicos a la muestra, los iones cargados positivamente de las proteínas se combinan con los iones cargados negativamente de los ácidos orgánicos.
Como resultado, se forma una sal de proteína que da como resultado la formación de un precipitado. Para la estimación cuantitativa de la albúmina, la precipitación formada en el tubo se mide por medio de las graduaciones presentes en el tubo del albuminómetro utilizado para la prueba. Para estimar solo la albúmina, se desarrolla una versión modificada de la prueba de Esbach. Según el método modificado, la orina se hace reaccionar con ferrocianuro de potasio al 10% y ácido acético en un matraz cónico graduado especialmente diseñado. Después de unos cinco minutos de centrifugación, se dice que cada 0,1 ml de precipitado representa albúmina al 1%.
Requisitos
Reactivo
- Reactivo de Esbach: añadir 10 gramos de ácido pícrico y 20 gramos de ácido cítrico a 1000 ml de agua destilada y mezclar bien. Se prefiere un reactivo nuevo para obtener un resultado más preciso.
- Muestra de orina
Materiales necesarios
- Albuminómetro de Esbach: El albuminómetro de Esbach es un tubo de vidrio con marcas. Se pueden ver dos marcas distintas donde la marca ‘U’ indica el nivel de orina y la ‘R’ indica el nivel de reactivo. Desde la base del tubo hasta la marca ‘U’, el tubo está graduado de 0-12 gramos. Cada una de estas cifras representa gramos de albúmina por 1000 ml de orina. Estas gradaciones ayudan a medir la cantidad de precipitado formado.
- Pipetas
Procedimiento de la prueba de Esbach
Prueba cualitativa
- Aproximadamente 3 ml de reactivo de Esbach se toman en un tubo de ensayo. A esto se le añaden gota a gota 2 ml de una muestra de orina filtrada.
- A continuación, se observa el tubo en busca de precipitación inmediata.
Prueba cuantitativa
- La orina se filtra para eliminar las células u otras partículas.
- Si la orina no es lo suficientemente ácida, se agregan unas gotas de ácido acético al 10% a la muestra de orina.
- La orina así preparada se añade al tubo del albuminómetro hasta la marca «U».
- A continuación, se añade el reactivo al tubo hasta la marca «R».
- Luego, el tubo se cierra con un tapón de goma y el contenido se mezcla invirtiendo suavemente varias veces.
- Luego se deja el tubo en reposo en posición vertical durante aproximadamente 24 horas, y al final se lee la escala para determinar el monto del depósito.
Resultado e interpretación de la prueba de Esbach
Prueba cualitativa
- Resultado positivo: un resultado positivo de la prueba de Esbach está representado por la formación de un precipitado amarillo tan pronto como el reactivo y la muestra de orina entran en contacto entre sí.
- Resultado negativo: Un resultado negativo de la prueba de Esbach está representado por la ausencia de precipitado amarillo o la formación de precipitado después de algún tiempo.
Prueba cuantitativa
- Los resultados de la prueba cuantitativa se pueden leer directamente. Si el precipitado está al nivel de las 4 graduaciones del tubo, esto indica que la orina contiene 4 gramos de albúmina por 1000 ml de muestra de orina.
Usos de la prueba de Esbach
- La prueba de Esbach se utiliza como prueba clínica para la estimación cuantitativa de la albúmina en la orina.
- Además, también se puede utilizar para la detección de otras proteínas en orina, así como en otras muestras.
Limitaciones de la prueba de Esbach
- El método de Esbach no es estrictamente preciso, ya que podría precipitar otras sustancias junto con la albúmina.
- Solo se debe utilizar la muestra recolectada durante un período de 24 horas.
- La orina con un peso específico superior a 1.010 debe diluirse, ya que podría no asentarse correctamente.
- La orina debe procesarse con ácido para aumentar la acidez de la muestra, ya que la precipitación solo se produce en condiciones ácidas.
- La concentración de albúmina inferior a medio gramo o superior a 12 gramos por 1000 ml de muestra de orina no puede detectarse mediante este método.
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